Laborrichtlinien zum Nachweis einer Monkeypox-Virusinfektion

Der Generaldirektor der Weltgesundheitsorganisation (WHO) erklärte den eskalierenden weltweiten Affenpockenausbruch am 23. Juli 2022 zu einer gesundheitlichen Notlage von internationaler Tragweite (Public Health Emergency of International Concern, PHEIC). Nach Angaben der WHO gibt es mehr als 35.000 Fälle in 92 Ländern/Gebieten und 12 Todesfälle am 17. August. Die meisten gemeldeten Fälle (mit Reisegeschichte) reisten in Gebiete in Europa und Nordamerika.

Affenpocken sind eine seltene Krankheit, die durch eine Infektion mit dem Affenpockenvirus (MPXV) verursacht wird – einem umhüllten doppelsträngigen DNA-Virus, das zur gleichen Familie von Viren gehört, die Pocken verursachen.Dieses Virus kann durch Kontakt mit Körperflüssigkeiten, Läsionen auf der Haut oder inneren Schleimhautoberflächen mit Symptomen wie Fieber, Kopf- und Muskelschmerzen übertragen werden.Die Inkubationszeit von Affenpocken beträgt normalerweise 6 bis 13 Tage, kann aber auch 5 bis 21 Tage (etwa drei Wochen) betragen.
Nach Angaben der WHO stammen die besten diagnostischen Proben direkt vom Ausschlag – Haut, Flüssigkeit oder Krusten, oder Biopsie, sofern möglich.Andere Methoden wie der Antigen- und Antikörpernachweis sind möglicherweise nicht nützlich, da sie nicht zwischen Orthopoxviren unterscheiden.

Bei der Manipulation der Proben von vermuteten, wahrscheinlichen oder bestätigten Fällen von Affenpocken im Labor wird ein risikobasierter Ansatz empfohlen.Daher müssen die Verfahren zum Nachweis des Vorhandenseins von MPXV, das als Krankheitserreger der Risikogruppe 3 eingestuft ist, in einem Labor der Biosicherheitsstufe 2 unter Verwendung der unten aufgeführten Geräteliste durchgeführt werden.

Gerätehandbuch für die Erkennung von Affenpockenviren

Lagerung von Proben und Reagenzien

Die MPXV-Proben sollten bei 2 °C bis 8 °C gekühlt werden oder müssen innerhalb einer Stunde nach der Entnahme eingefroren werden (-20 °C oder niedriger).Wenn die Transportzeit sieben Tage überschreitet, sollten die Proben bei -20 °C oder darunter gelagert werden.Für die Langzeitlagerung der Proben (>60 Tage nach der Entnahme) wird hingegen eine Temperatur von -70 °C empfohlen.

Biobase-Laborkühlschränke, Laborgefrierschränke und Ultratiefkühlschränke sind mit durchdachten Kühlsystemen und hochwertigen Materialien ausgestattet, die für die Lagerung temperaturempfindlicher biologischer Proben geeignet sind, die kritische Lagerbedingungen erfordern.

Probenhandhabung und -vorbereitung

MPXV kann während der Probenverarbeitung aufgrund von kontaminiertem Material oder unsachgemäßen Methoden übertragen werden.Infolgedessen sind erhöhte Maßnahmen zur biologischen Sicherheit zu beachten.Vor der Probeninaktivierung müssen Proben von Patienten mit Verdacht auf MPXV in einer funktionsfähigen Biosicherheitswerkbank der Klasse II vorbereitet werden;Dies ist jedoch für ordnungsgemäß inaktivierte Proben nicht erforderlich.

Abgesehen von dem Schutz, den die Biosicherheitswerkbänke bieten, entsprechen die biologischen Sicherheitswerkbänke der Klasse II von Biobase NSF 49 und EN 12469, verfügen über benutzerfreundliche Funktionen und sind zur Verbesserung der Sicherheit auf allen außen und innen lackierten Oberflächen mit antimikrobiellem Pulver beschichtet.Zur Trennung der flüssigen und festen Bestandteile der Probe sind Zentrifugen erforderlich.Sofern für das Verfahren unbedingt erforderlich, werden Sicherheitsbecher oder versiegelte Rotoren empfohlen.

Erkennung und Analyse

Zur Bestätigung der MPXV-Infektion wird ein Nukleinsäureamplifikationstest (NAAT) durchgeführt.Um einzigartige virale DNA-Sequenzen zu erkennen, wird entweder PCR-Echtzeit oder konventionelle Polymerase-Kettenreaktion (PCR) verwendet.Die Virenerkennung umfasst zwei Schritte.Die erste PCR erkennt Orthopoxviren, identifiziert jedoch nicht die Spezies, während die zweite PCR (oder Sequenzierung) spezifisch MPXV nachweist.

Ein Echtzeit-PCR-Thermocycler sorgt für eine effiziente Amplifikation von Nukleinsäuren für die Virusanalyse.Biobase bietet die neuen Swift™ PCR-Thermocycler mit integriertem Computer für den eigenständigen Betrieb von PCR-Programmeingabe, Überwachung und Analyse an.